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  • 杂志名称:中国现代医学杂志
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心
  • 国际刊号:1005-8982
  • 国内刊号:43-1225/R
  • 出版周期:旬刊
期刊荣誉:2000年、2002年二次被省科技厅、省新闻出版局评为一级期刊期刊收录:CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
中国现代医学杂志2005年第16期

人胰激肽释放酶基因的克隆及融合蛋白的表达

戴勇;彭武建;李体远;杜珙;孙文学;黄瑞芳

关键词:激肽释放酶, 基因克隆, 表达
摘要:目的开发激肽释放酶基因工程产品,为开展基因治疗高血压奠定基础.方法提取人胰腺组织总RNA,逆转录后PCR扩增激肽释放酶cDNA.回收、补平后插入质粒KS,构建出中间载体KSKK,酶切鉴定后双向测序分析激肽释放酶基因序列.从KSKK中切出激肽释放酶原及激肽释放酶基因,插入真核表达载体PET-28b(+),经酶切鉴定后,进行核苷酸序列分析和融合蛋白表达.结果本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比,有一个碱基不同,同源性为99.8%.将IPTG诱导表达进行SDS-PAGE电泳,与蛋白标准品比较在31800处可见明显的高表达带.免疫印迹实验表明重组蛋白具有KK的抗原性.结论已成功克隆并表达了人组织激肽释放酶基因,为进一步开发基因工程产品及进行基因治疗高血压研究奠定了基础.