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  • 杂志名称:中国现代医学杂志
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心
  • 国际刊号:1005-8982
  • 国内刊号:43-1225/R
  • 出版周期:旬刊
期刊荣誉:2000年、2002年二次被省科技厅、省新闻出版局评为一级期刊期刊收录:CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
中国现代医学杂志2013年第29期

人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及其在HEK293A细胞中的表达

丛明;李谌

关键词:BDNF, 创伤性脑损伤, 腺病毒载体, HEK293A细胞
摘要:目的 构建人脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)重组腺病毒真核表达载体,研究其在无BDNF分泌的HEK293A细胞中的表达情况,为临床上治疗创伤性脑损伤提供更多基础方面的研究资料.方法 ①以供体质粒和pAdEasy-1腺病毒系统作为底物构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体并包装病毒,检测滴度;②将含人BDNF基因的腺病毒液(A组,实验组)及未含任何基因片段的空白病毒液(B组,对照组)分别转染HEK293A细胞,同时设立空白组(C组),72 h后通过倒置荧光显微镜观察转染情况;③采用RT-PCR方法检测转染后各组细胞中BDNF基因mRNA表达情况;④采用Western blotting方法检测转染后各组细胞BDNF蛋白表达情况.结果 ①成功构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体,经过包装后病毒滴度为1.74×108 pfu/mL;②B、C两组细胞BDNF的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而A组细胞BDNF的mRNA表达量明显高于B、C两组,差异有统计学意义(P<0.05);③B、C两组细胞BDNF的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),A组蛋白表达相对OD值明显高于另外两组,差异有统计学意义P<0.05).结论 人BDNF重组腺病毒载体的成功构建不仅明显提高了BDNF基因在细胞中的表达水平,同时还为其进一步应用于创伤性脑损伤的体内实验研究打下基础.