首页>中国现代医学杂志
  • 杂志名称:中国现代医学杂志
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心
  • 国际刊号:1005-8982
  • 国内刊号:43-1225/R
  • 出版周期:旬刊
期刊荣誉:2000年、2002年二次被省科技厅、省新闻出版局评为一级期刊期刊收录:CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
中国现代医学杂志2015年第04期

叉头状转录因子O1基因过表达慢病毒载体构建及其大鼠系膜细胞株的建立

岳欣阁;刘飞;秦贵军;王庆祝;张月

关键词:叉头状转录因子O1, 慢病毒载体, 过表达, 系膜细胞, 大鼠
摘要:目的 构建含组成性激活突变型FoxO1(CA-FoxO1)基因的过表达慢病毒载体,并建立其过表达的大鼠肾小球系膜细胞株.方法 通过四质粒合成法构建包含CA-FoxO1编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-FoxO1).实验分为3组:空白对照组(NC组)、空慢病毒载体阴性对照组(LV-empty-FoxO1组)和过表达慢病毒载体组(LV-CA-FoxO1组).培养系膜细胞(RMCs)72h后,用流式细胞仪检测RMCs中绿色荧光蛋白(GFP)阳性率,并采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测FoxO1的mRNA及蛋白表达情况.结果 成功构建LV-CA-FoxO1,其病毒滴度为1×108 TU/ml.LV-empty-FoxO1组和LV-CA-FoxO1组GFP阳性率分别为84.5%和81.4%;与NC组相比,LV-CA-FoxO1组FoxO1的mRNA与蛋白表达量相当于NC组的27.92倍与5.41倍(均P<0.05);而NC组与LV-empty-FoxO1组FoxO1的mRNA及蛋白表达量差异均无统计学意义.结论 成功构建了大鼠FoxO1基因的过表达慢病毒载体,并建立了稳定过表达FoxO1的大鼠肾小球系膜细胞株,为进一步研究FoxO1的功能和作用机制奠定了研究基础.